外泌体分离纯化
本公司采用超速离心方法从细胞培养上清液、血清、血浆、尿液、脑脊液以及其他体液(腹水、羊水、乳液以及唾液等)中的提取外泌体,获取的高纯度外泌体颗粒,可进行后续的NTA、TEM、WB等分析。
样本准备
细胞上清 Cell culture supernatant细胞培养基必须使用去除 exosome的血清(如去外泌体胎牛血清,Exosome depleted Fetal Bovine Serum, VivaCell P/N: C38010050 )或者无血清培养基,以降低背景值的干扰(牛血清中含有大量牛源外泌体)。
1)细胞在正常含有血清的培养基中培养一定时间,细胞增长至约70%;
2)对于贴壁细胞,去除原有培养基,用PBS洗涤,更换新的含去外泌体血清的培养基或者无血清培养基;对于悬浮细胞,300×g,4℃,10分钟收集细胞,用PBS洗涤,使用不含外泌体的培养基或者无血清培养基悬浮细胞并继续培养;
3)细胞继续培养24-48小时,根据细胞的生长速度确定收取上清时间;
4)收集细胞上清,300×g,4℃,离心10分钟;小心吸取上清,注意避免吸入细胞或者细胞碎片;
5)上清0.22µm过滤,去除细胞碎片、凋亡小体和微囊泡;
6)将上清样本冻存于-80℃。
建议送样量:20ml以上
血浆 Plasma1)取全血至EDTA抗凝管中,轻柔混匀;
2)4°C条件下,2500×g,离心15min,取上清;
3)再次2500×g,离心15min,取上清即为血浆;
4)血浆于-80°C保存。
建议送样量:2ml以上
血清 Serum1)将4ml全血置于普通采血管中(注意收集血清样本不要加入抗凝剂)37℃凝固20-30 min;
2)2000×g离心10 min,取上清,淡黄色透明液体即为血清;
3)将血清置于-80°C保存。
建议送样量:2ml以上
尿液 Urine1)无菌容器收集清晨第一次尿液50ml;
2)加入蛋白酶抑制剂混合物(1.67 ml of100mM NaN3, 2.5ml PMSF (2 mg/ml in isopropyl alcohol), 50 µl Leupeptin (1 mg/ml in ddH2O));
3)立即处理或置于-80°C保存。
建议送样量:20ml以上
脑脊液 Cerebrospinal fluid1)收集脑脊液,放置冰上静置30min;
2)4℃ ,2000×g,离心10分钟,去除细胞或细胞碎;
3)取上清,立即处理或置于-80°C保存。
建议送样量:10ml以上