免疫学反应检测
淋巴细胞增殖抑制试验
间充质干细胞(P3)用丝裂霉素C处理后,按照1×106接种到24孔板中,37℃培养4小时使细胞贴壁。人外周血分离PBMC,用CFSE(终浓度为1µM)标记PBMC,接种PBMC到24孔板中,1×106/孔,每孔加10ug PHA,设置对照孔PBMC+PHA。培养4天后流式检测。CFSE为第一荧光(FL1), PE标记抗体为第二荧光(FL2),用CellQuestPRO软件获取数据,Modfit软件分析。
特定淋巴细胞亚群检测
间充质干细胞(P3)用丝裂霉素C处理后,按照1×106接种到24孔板中,4小时后, 接种PBMC浓度1×106/孔,每孔加10ug PHA,设置阴性对照孔(PBMC)。培养四天后,收集悬浮细胞,流式检测Th1/Th2/Th17和Treg,Flowjo分析结果。
淋巴细胞分泌TNF-α抑制试验
间充质干细胞(P3)用丝裂霉素C处理后,按照1×106接种到24孔板中,4小时后,接种PBMC按照1×106/孔,每孔加10ug PHA,设置对照孔PBMC和PBMC+PHA组。培养四天后,收集上清,Elisa法检测TNF-α浓度。通过Elisa结果可以看出MSCs组分泌TNF-α浓度小于PBMC+PHA组,MSCs具有抑制PBMC分泌炎症因子TNF-α的能力。